這里介紹一篇發(fā)表在Marine Drugs期刊上的文章,題目是《深共晶溶劑-雙水相體系高效純化條斑紫菜R-藻紅蛋白》,通訊作者為哈爾濱工業(yè)大學(xué)(威海)環(huán)境科學(xué)與工程、海洋科學(xué)學(xué)院的王全富教授。引用信息為Marine Drugs. 2020 Dec;18(12):618
其中,圓二色光譜為Bio-Logic公司的MOS-500機(jī)型測得,用于檢測蛋白樣品的二級結(jié)構(gòu),并對比兩種純化方法的結(jié)果差異。
條斑紫菜中富含R-藻紅蛋白(R-PE),是一種海洋生物活性蛋白。本研究采用深共晶溶劑-雙水相體系(DES-ATPS)結(jié)合硫酸銨沉淀法對R-PE進(jìn)行了純化,并采用一定的工藝進(jìn)行了表征。首先,選擇氯化膽堿-尿素(ChCl-U)作為合適的DES形成ATPS用于R-PE的提取。然后進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),在最佳條件下(0.040mg R-PE加入0.35g/K2HPO4(0.8g/mL,0.5ml)提取20min),R-PE的純度(A565/A280)為3.825,收率為69.99%(w/w)。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結(jié)果表明,純化的R-PE含有三條主帶。純化后,在native-PAGE上出現(xiàn)一條帶。紫外-可見光譜在495、540和565nm處有特征吸收峰。在495nm激發(fā)時(shí),R-PE的發(fā)射波長為570nm。所有光譜結(jié)果表明,R-PE的結(jié)構(gòu)在整個(gè)過程中保持不變,證明了該方法的有效性。透射電子顯微鏡(TEM)顯示,聚集和周圍現(xiàn)象是R-PE萃取的驅(qū)動力。本研究為藥物開發(fā)提供了一種綠色、簡便的R-PE純化方法。